艾思瑞健康大讲堂：吡非尼酮或可克制非小细胞

【导读】

肺癌是最常见、造成死亡最多的癌症，其中非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌中最高发的亚型。由于肿瘤的高转移才能，尽管实施了新的靶向治疗和化疗方案，但NSCLC 患者的死亡率仍然过高。癌症相干的成纤维细胞(CAFs)是肿瘤间质的重要组成部分，它是致癌、增殖和侵袭的重要原因，并且在增进癌症进展中施展要害作用。CAFs与肿瘤细胞之间的接触已被证明可以通过激活抗凋亡道路或诱导上皮细胞向间质转化(EMT)来增进肿瘤细胞的增殖。因此，靶向CAFs可能对治疗癌症有价值。

吡非尼酮(以艾思瑞为重要代表药物，下文简称PFD)是一种吡啶类化合物，具有抗纤维化、抗炎、抗氧化的作用。有报道称吡非尼酮可以克制CAFs的细胞活气和胶原生成，克制CAFs在乳腺癌中诱导肿瘤生长，也有报道显示吡非尼酮使肿瘤微环境正常化。然而吡非尼酮对NSCLC克制机制的数据还不是很多。

【研讨进展】

来自日本大阪大学医学院的专家团队，进行了一项旨在进一步剖析吡非尼酮在NSCLC肿瘤微环境中的作用的研讨，评估PFD对正常成纤维细胞的特征，以及肺正常成纤维细胞(LNFs)和CAFs的临床样本的影响。该论文已发表在《SCIENTIFIC REPORTS》上。

【研讨成果】

研讨团队使用了来自不同组织类型的细胞，其中1型来自腺鳞癌，2型来自腺癌，3型来自鳞状细胞癌。

成果一：吡非尼酮克制LNFs和CAFs的激活程度和细胞因子的发生。

如上图所示，在显微镜下，来自3个NSCLC组织的所有细胞均显示为典型的纺锤状成纤维细胞，与PFD共同处置后，无论是在CAFs还是在LNFs中，细胞生长均被克制。

此外，如上图所示，PFD组的ACTA2、胶原蛋白我和IL-6程度也有所降落。

虽然透明质酸合成酶2(ha-2)的mRNA程度在CAFs中并不比在LNFs中高，但与PFD共处置后，其表达受到了强烈的克制，LNFs和CAFs的平均降幅分离为0.07和0.08。Western blot剖析显示了与RT-PCR雷同的趋势。

在接下来检测PFD对细胞因子发生的克制作用的实验中，ELISA检测成果显示，IL-6的浓度在CAFs中高于LNFs(1.64倍)，而TGF-β1的浓度几乎相等，仅高于LNFs(1.09倍)。吡非尼酮克制IL-6和TGF-β1细胞因子的发生，对IL-6的克制作用更大，平均降低0.65，而TGF-β的降低率为0.10。

成果二：CAFs和LNFs对NSCLC细胞的EMT状况有很强的影响，而吡非尼酮除了对成纤维细胞或NSCLC细胞有直接作用外，还能克制肿瘤-基质相互作用。

为探究PFD对NSCLC细胞与CAFs或LNFs相互作用的影响，研讨团队将A549和NCI-H358细胞与CAFs或LNFs共同造就。为了肯定PFD对这些细胞相互作用的影响，而不是对细胞本身的影响，在造就24小时后去除PFD。

成果显示CAFs或LNFs处置后，A549细胞的形态明显转变为尖利、不规矩的形态，细胞与细胞的接触作用削弱，而PFD预处置CAFs或LNFs对这些变化表示出明显的克制作用。

通过免疫荧光检测粘附蛋白E-cadherin的表达来评估A549细胞的粘附特征，成果如下图所示：

在CM与CAFs或LNFs的细胞接触时，E-cadherin的表达降低，在CAFs -CM处置的细胞中降低作用更显著，PFD预处置可恢复两种细胞系中E-cadherin的表达。纤维衔接蛋白的表达程度随着CM的转变而升高，PFD对LNFs或CAFs的CM均有克制作用。

用CM、CAFs或LNFs造就NSCLC细胞，视察其侵袭和迁移才能。成果如下图所示：

与未处置细胞相比，CM处置CAFs或LNFs明显加强了A549细胞的侵袭才能，其中CAFs -CM比lnf处置细胞的侵袭才能加强更显著 (图2C)。

相反，PFD预处置降低了A549细胞的侵袭。CAF或LNF CM处置A549细胞迁移也分离增长了2.60和2.70。

而PFD预处置CAFs或LNFs则克制了A549细胞迁移(图D)。在创面愈合试验中也得到了相似的成果(图E)。

此外，与来自未处置细胞的CM相比，PFD预处置CAFs的CM可以削弱A549细胞的迁移，表明PFD预处置CAFs的CM可以削弱A549细胞的迁移。

如上图所示，A549-CM延伸了a-SMA高表达CAFs的形态，而PFD预处置降低了CAFs的变化。

此外，A549细胞在CM处置后加强了CAFs的迁移和侵袭才能，而这些才能被PFD预处置A549所克制。

成果三：人体内CAFs增进肿瘤进展，而吡非尼酮通过克制肿瘤-间质串扰克制肿瘤进展。

研讨团队将带有CAFs的A549或NCI-H358细胞按2:1的比例移植到裸鼠背部右侧，未带CAFs的细胞移植到裸鼠背部左侧皮下，以检测PFD对体内肿瘤进展的影响。

植入后2周，开端每日给药PFD，连续3周。成果发现CAF共植入组肿瘤生长更显著，而PFD明显克制A549细胞的肿瘤生长，NCI-H358细胞的肿瘤生长差别不显著。

在两种细胞类型中，PFD在NSCLC单独组中也显示出肿瘤生长克制趋势。免疫组织学剖析显示，共植入组E-cadherin的表达低于对比组(A549细胞中E-cadherin的表达为0.27倍，NCI-H358细胞中E-cadherin的表达为0.37倍)。

但经PFD处置后，恢复与对比组相比，共植入组a-SMA表达呈弥漫性增厚，经PFD处置后，无论是在共植入组还是单独NSCLC组，a-SMA表达均呈稀少状。

成果四：吡非尼酮治疗人类IPF患者的进程中，还改善了人体组织中的肿瘤标志物的程度。

研讨团队研讨团队对接受PFD治疗的IPF患者的肿瘤标志物进行评估，包含E-cadherin、a-SMA和Ki67。作为对比，也对未进行PFD治疗的肿瘤标本进行了评估。两组患者大多数为鳞状细胞癌。

虽然E-cadherin的表达几乎雷同，但在接受PFD治疗的患者肿瘤中，α- SMA阳性水平和Ki67标志指数均有所降低。

【研讨结论】

上述研讨在细胞程度和动物程度上，证明了吡非尼酮可以克制促肿瘤生长因子的的发生，克制肿瘤-基质相互作用;在人体组织程度，证明了吡非尼酮可以改善肿瘤标志物的程度。

因此，吡非尼酮(以艾思瑞为重要代表药物)可能有很大的潜力作为一种新的NSCLC治疗药物。吡非尼酮治疗NSCLC的前瞻性临床实验值得期待。

【参考文献】

Fujiwara A, Funaki S, et, al. Effects of pirfenidone targeting the tumor microenvironment and tumor-stroma interaction as a novel treatment for non-small cell lung cancer. Sci Rep.